关键…
PCR 特异性的关键是引物设计。使用不合适的 PCR 引物表现为特异性差、扩增出多条带、形成引物二聚体、不出带或出带弱等。
常见问题
PCR 没有产物或二聚体太多
顺序排查步骤：
- 引物设计错误吗，Reverse引物方向合成对了吗?
- 其他引物好吗？
- 模板是否被污染？
尝试解决步骤：
- 换一个引物
- 换模板或增加模板量
- 调节 PCR 时退火温度
构建的质粒不能编码基因
- Forward引物是否存在移码突变？
- 没有注意终止密码子？
- 载体性能不佳？
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